骨化三醇对胆管结扎所致小鼠肝纤维化的保护作用及其机制

摘要

目的:探讨骨化三醇对胆总管结扎(BDL)诱导的小鼠肝纤维化的保护作用,并阐述其可能的作用机制.方法:选用45只8～10周雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、肝纤维化模型组(模型组)和骨化三醇治疗组(治疗组),每组15只.假手术组小鼠绕胆总管穿过手术线,不结扎.模型组小鼠双重结扎胆总管并离断.治疗组小鼠术后2.5μg·kg-1腹腔注射骨化三醇,每周3次.假手术组和模型组小鼠注射等体积生理盐水.术后继续给药4周,第28天眼眶取血,取小鼠肝脏.术后第2天检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)和羟脯氨酸(Hyp)水平.苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红染色观察各组小鼠肝组织病理形态学和肝组织纤维化程度.Western blotting法检测各组小鼠肝组织中维生素D受体(VDR)细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)、转化生长因子 β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和结蛋白(Desmin)表达水平.免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织中 α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况.结果:与假手术组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST活性及TBA、TBIL和Hyp水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组小鼠血清中ALT和AST活性及TBA、TBIL和Hyp水平明显降低(P<0.05).HE染色,假手术组小鼠肝小叶正常,组织结构较为完整,未见炎性细胞浸润;模型组小鼠肝组织出现炎性细胞浸润,坏死灶和胶原沉积较为明显;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织坏死灶区域明显减少,炎性浸润有所改善.天狼猩红染色,假手术组小鼠肝组织仅有少量胶原沉积出现在中央静脉周围;模型组小鼠肝组织中央静脉及汇管区出现明显胶原沉积;与模型组比较,治疗组胶原沉积明显减少.Western blotting法检测,与假手术组比较,模型组小鼠肝组织中ERK、p-ERK、α-SMA、TGF-β1、ColⅠ和Desmin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中ERK、pERK、α-SMA、TGF-β1、ColⅠ和Desmin蛋白表达水平明显降低(P<0.05).免疫组织化学,模型组小鼠肝组织中α-SMA和TGF-β1蛋白表达量高于假手术组;治疗组小鼠肝组织中α-SMA和TGF-β1蛋白表达量明显低于模型组.结论:骨化三醇通过激活维VDR,下调ERK蛋白表达,降低TGF-β1表达,减少肝星状细胞(HSCs)激活,抑制胶原在组织间沉积,从而缓解BDL诱导的小鼠肝纤维化.