人早幼粒细胞cDNA文库中与GINS2发生相互作用靶蛋白的筛选和鉴定

摘要

目的:采用酵母双杂交系统筛选与人GINS2编码蛋白发生相互作用的靶蛋白,阐明其在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的致病信号及相关机制.方法:采用热激法将诱饵质粒pGBKT7-GINS2与人早幼粒细胞cDNA文库质粒共同转化至酵母AH109感受态细胞中,筛选与GINS2编码蛋白相互作用的文库蛋白.利用多重报告基因检测和DNA测序对编码互作蛋白的阳性克隆进行生物信息学分析.结果:成功从文库中筛选到15个初始阳性克隆,其中10个能激活腺苷酸琥珀酸合成酶2(ADE2)和组氨醇氨基盐转移酶3(HIS3)报告基因,13个能激活β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因.对10个能在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基中生长的阳性克隆行DNA测序和基本局部比对搜索工具(BLAST)比对分析后,除8和9号测序失败,其余8个阳性克隆分属8种不同的蛋白编码基因,分别是RNA结合基序蛋白39(RBM39)、泛素样修饰因子激活酶1(UBA1)、金属硫蛋白2(MT2A)、线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)、N-乙基马来酰亚胺敏感性融合蛋白辅因子(NSFL1C)、脂肪酰基辅酶a还原酶1(FAR1)、双特异性磷酸酶1(DUSP1)和细胞表面抗原14(CD14).结论:成功筛选到与GINS2发生相互作用的8个功能蛋白,推测目的蛋白可能在细胞损伤、转录调控和增殖代谢等方面发挥重要作用.