人成体肝脏干细胞体外分离、培养及鉴定

摘要

目的:体外分离、培养人成体肝脏干细胞,确定肝癌干细胞的表面标志物,寻找肝脏干细胞新的来源.方法:以肝癌患者的癌旁组织做为肝脏干细胞的来源,进行体外培养,摸索培养条件,待细胞稳定传代后,通过免疫磁珠法初步分离C-kit+细胞,对肝脏干细胞进行初步筛选,最后对肝癌的癌旁组织及C-kit+细胞利用免疫组化及免疫荧光化学染色鉴定AFP+、CK19+双阳性表达,证实癌旁组织中存在肝脏干细胞.结果:肝细胞生长因子(HGF)、α-成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)及白血病抑制因子(LIF)对肝癌癌旁组织细胞的原代培养非常重要,可以获得比较稳定的细胞以便传代.免疫荧光组织化学染色证实癌旁组织中存在肝脏干细胞,经体外培养,免疫磁珠初步分离C-kit+细胞后,获得小圆形细胞,此类细胞共同表达AFP及CK19.结论:人类肝癌的癌旁组织中存在肝脏干细胞,可以联合其表面表达的标志物,将C-kit+/AFP+/CK19+做为鉴定分离肝脏干细胞的一种方法.体外分离培养得到的小圆形细胞即卵圆细胞具备向肝细胞及胆管上皮细胞双向分化的潜能.