稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立

摘要

目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)/增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白真核表达载体pEGFPNl-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y.方法:采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHRz全长cDNA片段.用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1,构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,并用LipofectamineTM转染到SH-SY5Y细胞,通过0418筛选,建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位.结果:扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPNl-MCHR2;RT-PCR、Westernblotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达,激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPNl-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜,而转染空质粒pEGFPNl的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质.结论:成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株.