狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化

摘要

将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中,转化至大肠杆菌Rosetta株,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析显示,相对分子量约为82 kD,与预期大小一致.Westem-blot检测结果表明,融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应.为获取大量ELISA包被用核蛋白,试验还借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、菌密度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件.结果表明:27～32℃,OD550 0.3～0.4,IPTG 0.06 mmol/L、诱导至OD550值不再增加时为最佳诱导表达条件.优化后经扫描分析显示,所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20%以上.经包涵体纯化和亲和层析纯化,可获得纯度较高的GST融合蛋白.