大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要

以大花君子兰为材料研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对君子兰ISSR扩增结果的影响,并对影响PCR反应体系的主要成分及退火温度进行筛选和优化,确立了适合君子兰ISSR-PCR分析的最佳反应体系:在20 μL的反应体系中,Mg~(2+)为2.0 mmol/L,模板DNA用量为50 ng/μL,Taq酶0.4 U,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.4 mmol/L.筛选出了13 个适宜君子兰遗传分析的ISSR引物,确定最适宜退火温度为52～56℃.