海洋源金属硫蛋白毕赤酵母重组菌株的构建及其表达活性研究

摘要

为实现海洋源金属硫蛋白的高效表达.将酵母表达载体pPICZαA-SUMO-OpMT通过电转化法转入毕赤酵母菌GS115中,利用博来霉素质量浓度梯度筛选,在耐受高质量浓度(4.0 mg/mL)博来霉素的YPD平板上筛选得到阳性高拷贝GST115/pPICZαA-SUMO-OpMT重组酵母菌株,进一步通过MMH和MDH平板筛选得到2株甲醛利用型(Mut+型)重组酵母菌株.SDS–PAGE电泳和Western blotting显示诱导表达的融合蛋白SUMO-OpMT分子量约23 kD,与预期一致,说明可溶性融合蛋白SUMO-OpMT在重组酵母菌中得到了表达.同时,HPLC检测重组毕赤酵母菌发酵液,结果也表明重组毕赤酵母菌成功表达了可溶性目的蛋白OpMT.通过对重组工程菌中MT活性检测发现,其对重金属镉耐受力增强,说明重组工程菌成功表达出有活性的金属硫蛋白.为天然高效重金属生物解毒剂的成功开发和推广提供理论依据.