幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagX基因的克隆及生物信息学特征预测

摘要

目的：构建表达幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）NCTC11637IV型分泌系统cagX（HP0528）全长编码基因的原核表达载体。方法：用PCR方法从H．pylori基因组DNA中扩增cagX编码基因片段，将cagX克隆至pGEM-T载体，转化大肠杆菌DH5ct，再将其定向插入pET32a（＋）载体中，经IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果，并进行序列测定和生物信息学预测。结果：克隆幽门螺杆菌NCTC11637cagX基因全长1569bp（基因库登录号为EF608160），编码522个氨基酸，融合蛋白的相对分子质量约为80．5kD。与基因库公布的其他H．pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为96％～99％。预测结果显示H．pylori 11637，26695，J99间二级结构有一定差异，但抗原性相同。结论：成功克隆并表达了H．pyloriNCTC 11637 cagX基因，并对其生物学特征进行了预测，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。