应用正交实验法优化DNA重复序列的PCR扩增体系

摘要

采用L9(34)正交实验法,对与人神经系统疾病相关的DNA重复序列PCR扩增体系中的模板DNA浓度、Taq酶浓度、引物浓度、dNTP浓度4种影响因素进行了优化筛选,发现引物浓度对扩增结果影响的显著性最大.在此基础上进行了引物浓度单因素实验.得到最优DNA重复序列PCR扩增体系在25μL反应体系中各组分的最适浓度分别为:模板3 ng/μL、Taq酶0.75 U、dNTPO.25 mmol/L、引物0.3μmol/L通过优化前后反应体系的对比,扩增目的产物的量均有较大程度的提高.该优化体系的建立为进一步研究与人遗传病相关的DNA重复序列的结构特性及阐明该类遗传疾病的分子机理奠定了基础.