地衣芽孢杆菌α-耐高温淀粉酶基因的克隆及原核表达

摘要

地衣芽孢杆菌(BacillusLicheniformis)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α-淀粉酶(α-amy lase)的优良菌株.本实验在提取地衣芽孢杆菌完整的基因组DNA序列的基础上,通过PCR方法克隆了耐高温淀粉酶的结构基因全长1449bp,与pUCm-T载体连接转化入宿主菌DH5α中,经过酶切鉴定筛选出阳性的克隆菌,再提取质粒与表达载体pET-28a(+)酶切后连接转化入宿主菌DE3中,其阳性克隆在37℃1.0mmol/LIPTG诱导下,α-淀粉酶的基因得到了较好的表达.表达产物经SDS-PAGE鉴定,确定表达的蛋白大小为58000Dal左右,与理论推导的分子量相一致;并初步对酶及活性及酶活最适温度和pH进行了研究.