基于网络药理学及体内外实验研究连翘不同提取液抗RSV作用

摘要

目的探讨连翘不同提取液体内外抑制呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的药理效果。方法运用网络药理学,预测连翘抗RSV作用的具体成分以及可能的作用通路。采用细胞病变效应结合MTT法,评价连翘不同提取液对RSV的抑制活性。鼻腔接种法建立RSV感染小鼠模型,随机分为6组,每组10只。正常组和模型组给予等体积的生理盐水;利巴韦林组给予利巴韦林溶液(4 mg/mL);高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予连翘煎煮离心液4、2、1 g/kg。连续给药5 d后,检测血常规、肺指数,HE染色法观察肺组织的病理变化,免疫组化法检测TLR4、NF-κB p65及p38 MAPK的表达水平。结果获取21个潜在活性成分,抗RSV作用靶点129个,富集548个生物过程及112条信号通路,涉及癌症中的蛋白多糖、HIF-1信号通路、TNF信号通路等。体外实验显示,连翘不同提取液对RSV感染的A549细胞有不同程度的抑制作用,抑制效果较强的是连翘煎煮离心液。体内实验显示,与正常组相比,模型组白细胞(white blood cell,WBC)、淋巴细胞(lymphocyte,LYM)、单核细胞(mononcyte,MON)计数及肺指数显著升高(P<0.05),中性粒细胞(neutrophil,NEU)计数下降(P<0.05);与模型组相比,利巴韦林组、高剂量组、中剂量组、低剂量组WBC、LYM、MON计数明显下降(P<0.05),NEU计数升高(P<0.05),肺指数显著下降(P<0.05);与利巴韦林组相比,中剂量组、低剂量组WBC、LYM、MON计数升高(P<0.05),NEU计数下降(P<0.05),高剂量组WBC、LYM计数升高(P<0.05),高剂量组、中剂量组、低剂量组肺指数升高(P<0.05);与高剂量组相比,低剂量组WBC、LYM计数升高(P<0.05),NEU计数下降(P<0.05)。HE染色显示模型组肺组织增生,大量炎性细胞浸润,利巴韦林组、低剂量组、中剂量组、高剂量组肺组织病理损伤得到明显改善。与正常组相比,模型组TLR4、NF-κB p65、p38 MAPK平均光密度值升高(P<0.05);与模型组相比,利巴韦林组、高剂量组TLR4、p38 MAPK及NF-κB p65平均光密度值下降(P<0.05),中剂量组TLR4、p38 MAPK平均光密度值下降(P<0.05)。结论连翘通过多成分、多靶点、多通路发挥抗RSV作用。在体外,连翘不同提取液对RSV均有抑制效果,在体内,连翘煎煮离心液对RSV引起的肺炎有明显治疗作用。