基于网络药理学探究祛瘀平肝化痰汤降压作用机制及实验验证

摘要

目的运用网络药理学探讨祛瘀平肝化痰汤治疗高血压病的可能靶点及作用机制,并选取部分关键靶点及通路进行实验验证,为其临床应用及后续研究提供理论支持。方法运用TCMSP、BATMAN、TCMIP网络药理学分析平台挖掘祛瘀平肝化痰汤的中药有效成分,运用SWISS、STITCH数据库整理其作用靶标;以OMIM、TTD、GeneCards数据库挖掘高血压病的相关靶标并与药物成分靶标取交集,整理后得到祛瘀平肝化痰汤的成分-疾病靶标;通过STRING数据库及Cytoscape软件,构建蛋白互作的网络图,并筛选关键靶点;最后将所得的靶标及通路进行富集分析。依据网络药理学所得结果,设置4组SD大鼠进行实验验证,包括空白组、模型组、中药组、西药组。除空白组外,其余组以N’-硝基-L-精氨酸(N'-nitro-L-arginine,L-NNA)腹腔注射进行造模。空白组与模型组予纯净水灌胃,中药组予祛瘀平肝化痰汤20.29 g/kg,西药组予卡托普利混悬液2.11 mg/kg,每天灌胃2次,连续4周。HE染色观察胸主动脉病理形态变化,ELISA法检测血清中肾素(Renin)、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮(aldosterone,Ald)的含量,免疫组化检测胸主动脉内皮素1(endothelin-1,ET-1)的含量。结果整理各网络药理学分析平台数据得到祛瘀平肝化痰汤治疗高血压病相关的靶点有162个,最终通过筛选得到EDN1、NOS3、INS、TNF、VEGFA、ACE等34个关键蛋白靶点,主要富集在血管收缩调节、血压调节等生物过程及钙、肾素-血管紧张素系统、肾素分泌等信号通路。动物实验结果显示,中药组和西药组大鼠胸主动脉内膜结构较模型组完善;空白组、中药组、西药组经灌胃4周后,Renin、AngⅡ、Ald表达均较模型组降低(P<0.01);镜下观察免疫组化结果,模型组的ET-1表达显著高于空白组及各给药组(P<0.05)。结论祛瘀平肝化痰汤可以通过多途径、多靶点调节血压,其药理作用可能通过干预肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin angiotensin aldosterone system,RAAS)、血管内皮舒缩等得以实现。实验结果表明祛瘀平肝化痰汤能够改善血管状态,降低血清中Renin、AngⅡ、Ald的表达,干预RAAS,抑制血管内ET-1的释放,保护血管内皮。