莱茵衣藻中IFT80蛋白多克隆抗体的制备及其应用

摘要

IFT80蛋白是莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)纤毛内运输蛋白(intraflagellar transport,IFT)复合体中的一个重要组分,获得IFT80蛋白抗体为研究该蛋白作用机理提供有力的实验材料。通过构建大肠杆菌重组表达载体pGEX-4T-ift80,将重组表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta中,构建表达IFT80蛋白的重组菌株;在合适的时间点加入浓度适当的IPTG诱导重组菌株表达IFT80蛋白;将收集的蛋白上清液过柱纯化,再以纯化后的IFT80蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,动脉取血后,将血清分离纯化获得莱茵衣藻IFT80多克隆抗体。结果:经ELISA法测定该抗体效价达到512000,Westernblot测定该抗体特异性好。该抗体可用于莱茵衣藻IFT80蛋白的检测和功能鉴定,对于研究莱茵衣藻IFT80蛋白的作用机理及生物学功能研究等具有重要意义。