奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌PCR和LAMP检测方法的建立

摘要

为快速鉴定因肺炎克雷伯菌侵染引起的奶牛乳房炎,进一步为该疾病提供更合理的治疗方案,分别以肺炎克雷伯菌16S-23S rDNA内部转录间隔层序列(Internal transcribed spacer,ITS)和脲酶UreD基因为靶点,利用PCR技术和环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)构建奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌快速鉴定方法。结果表明,利用PCR技术扩增ITS序列能准确鉴定出肺炎克雷伯菌,在核酸质量浓度为5×10^(-2)ng/μL的环境中依然能实现稳定扩增;利用LAMP技术扩增UreD基因的最佳反应温度为62℃,其最低检测核酸质量浓度为5×10^(-7)ng/μL,检测灵敏度是PCR方法的105倍。综上,建立了PCR技术和LAMP技术快速鉴定奶牛乳房炎型肺炎克雷伯菌的方法,特异性强且灵敏度高。