牛轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要

用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法.该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg·mL-1,鼠抗BRV IgG工作浓度为5 μg·mL-1,样品反应时间60 min,酶标抗体工作浓度为1:5 000,以OD450 nm≥0.432作为阳性判定标准.该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,最低检测浓度为1.41 μg·mL-1,并与牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛冠状病毒(BCV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)等病原无交叉反应.用建立的ELISA方法与BRV RT-PCR方法同时检测40份临床粪便样品,符合率达到95%.结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和较高的敏感性,可用于BRV的快速检测.