牛呼吸道综合症多重PCR检测方法的建立

摘要

为了建立针对BRDC常见的主要病原牛黏膜病病毒(BVDV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)的一步法多重RTPCR,引入了新型的具有反转录酶和DNA聚合酶活性的rTth DNA聚合酶,通过对退火温度和引物浓度的优化,敏感性和特异性的检测,最终确定最佳退火温度为54.5℃,最佳引物浓度为0.6 uM.对BHV-3、BRSV和BVDV的最小检测量分别为162、16和21个TCID50/0.1 mL.与牛传染性鼻气管炎病毒、冠状病毒、腺病毒,以及多杀性巴氏杆菌、肺炎链球菌、化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌等没有交叉反应.建立起的mRT-PCR检测方法可用于鼻腔分泌物的检测,为进一步mRT-PCR试剂盒的组装奠定了基础.