猪种、牛种、羊种、绵羊种布鲁菌多重PCR检测方法的建立及应用

摘要

为建立在临床样本能够同时检测猪种、牛种、羊种、绵羊种布鲁菌的多重PCR方法,根据NCBI已收录的布鲁菌全基因,设计并合成4对特异性引物,通过优化多重PCR的反应条件,建立能够同时检测4种布鲁菌的多重PCR诊断方法.特异性试验结果表明,可以从4种布鲁菌以及 4 种细菌混合物中扩增出大小分别为276、494、733和976 bp的特异性条带,对照组的检测结果为阴性;敏感性试验结果表明,对4种病原菌基因组DNA的检出量为猪种32.2 pg、牛种21.3 pg、羊种27.5 pg、绵羊种43.2 pg;人工模拟感染样本检测结果表明,能从混合感染的病料中特异地检测出 4 种病原菌.应用该方法对 200 份临床奶山羊乳样进行检测,结果检出4份阳性.建立的多重PCR方法具有特异性强、敏感度高、稳定性好的特点,可以有效地检测 4 种布鲁菌的感染.