PEDV nsp15基因真核表达载体的构建及蛋白的表达

摘要

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)含有一种名为Nsp15的非结构蛋白,为了研究Nsp15蛋白在侵染宿主细胞时产生的作用,成功构建了PEDV Nsp15基因的真核表达载体。通过PCR技术扩增Nsp15基因片段,经双酶切连接到pCMV-Myc载体上,酶切鉴定及测序结果证实PEDV Nsp15基因成功克隆到pCMV-Myc载体中,并将重组质粒命名为p CMV-Myc-Nsp15。将重组质粒pCMV-Myc-Nsp15转染至IPEC-J2细胞中,利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测pCMV-Myc-Nsp15的表达以及定位情况。结果显示,pCMV-Myc-Nsp15在IPEC-J2细胞中成功表达,并且在胞质胞核均匀分布。为进一步研究PEDV Nsp15蛋白的功能奠定基础。