猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的表达与纯化

摘要

根据GenBank报道的PRRSV VR2332基因序列设计引物,经RT-PCR扩增,得到大小约为390 bp的阳性产物;利用BamHⅠ,EcoRⅠ位点将N蛋白基因片段克隆到pET-28a载体,构建原核重组表达质粒pET-N,转化BL21(DE3)并进行SDS-PAGE,Western blot分析.结果表明:克隆的N蛋白基因与GenBank报道的VR2332基因同源性为93.83%;重组菌株经IPTG诱导后,N蛋白基因得到了高效表达;经筛选得到最佳诱导条件,即1 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量可达菌体蛋白总量的52.635%,SDS-PAGE后切胶回收可得到纯化的N蛋白,为进一步制备免疫胶体金试纸条或ELISA试剂盒提供基础.