胶原酶消化刮取再消化法分离培养犬静脉内皮细胞的实验研究

摘要

目的 探讨犬大隐静脉内皮细胞(endothelial cells,ECs)体外分离培养的新方法.方法 通过将内膜翻转后结扎两端,0.1％胶原酶消化后刮下内皮层,用胶原酶再消化法获取内皮细胞,用低糖DMEM培养基再加入适量内皮细胞生长因子培养,以0.25％胰蛋白酶进行消化传代培养.用免疫荧光法、免疫组织化学法及光镜、扫描电镜法鉴定所得细胞系.结果 本方法分离的细胞在体外培养2周后光镜下胞体呈单层铺路石状排列,免疫荧光和免疫组织化学检测Ve-Cadherin阳性,扫描电镜观察见细胞呈梭形以及细胞表面较多微绒毛.本方法与传统的Veronica Tisato分离法比较,细胞存活率显著提高[(75.39±12.61)％vs(47.28±9.59)％,P<0.01].结论 采用胶原酶消化刮取再消化法能可靠地获取纯化的犬大隐静脉ECs,获取的ECs在体外可以连续大量增殖传代.