结核分支杆菌分泌蛋白Mtb81在大肠杆菌中的高效表达

摘要

目的通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达, 获得大量纯化的重组Mtb81蛋白.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增结核分支杆菌H37Rv Mtb81DNA序列;将目的基因与pGEM-T连接, 转入E.coli-DH5a大量繁殖后,提取质粒DNA, 酶切鉴定、测序;构建pET24b-Mtb81重组质粒,然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3); 诱导转化菌株,通过SDS-PAGE电泳鉴定Mtb81表达水平,采用His.band纯化 Mtb81蛋白.结果 pGEM-T/Mtb81内插入序列测序表明与报道的序列相同;pET24b-Mtb81在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的 30 % 左右,相对分子质量约 88 ku; 纯化后的Mtb81样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为 95 % 左右,从培养菌中可获得200 mg/L左右纯化的蛋白.结论 pET24b -Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白,大量纯化的Mtb81为进一步的研究、应用奠定了基础.