肌肉特异性表达猪肌肉生长抑制素前肽载体的构建与验证

摘要

为了在肌肉中特异性表达猪肌肉生长抑制素前肽,构建了重组表达载体,并体内验证其表达有效性.以猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增肌肉生长抑制素前肽cDNA,与猪α-actin 5’调控序列、去除CMV启动子的表达载体pcDNA3.1连接构成肌肉特异性表达载体pcDNA3.1-MP,将重组载体分别注射到小鼠股四头肌中,RT-PCR检测证明其表达有效性及生肌调节因子mRNA水平的变化.结果显示,PCR扩增出819 bp的特异性片段,DNA测序结果证明该克隆片段与猪肌肉生长抑制素前肽序列具有极高的的一致性,蛋白编码无突变,RT-PCR显示注射猪肌肉生长抑制素前肽的重组载体可使肌肉内猪肌肉生长抑制素前肽得到有效转录,生肌调节因子mRNA水平显著上调.本试验为在转基因动物的肌肉中表达外源基因奠定了基础.