羊草铁蛋白基因(LcFER)全长cDNA的克隆及原核表达

摘要

羊草(Leymus chinensis)是东北地区盐碱地的乡土物种,蕴含着丰富且高效的抗盐碱特性相关基因.本试验利用RACE法从羊草中克隆了抗盐碱相关的铁蛋白基因(LcFER)的全长并进行了序列信息分析,并利用限制性内切酶BamH Ⅰ和Xba Ⅰ构建了重组质粒pGEX-KG-LcFER.转化大肠杆菌BL21 (DE3)后,经IPTG诱导,用SDS-PAGE分析表达产物.结果表明:羊草铁蛋白基因(LcFER)编码区为729 bp,与小麦、大麦、水稻等铁蛋白基因同源性较高,包含铁离子结合位点、铁核中心和铁离子通道3个保守的功能域,与亲缘关系较近的小麦和大麦的FER蛋白的二级结构一致.重组质粒pGEX-KG-LcFER经酶切和测序证实构建成功后,SDS-PAGE分析诱导表达的蛋白质,获得的目标蛋白相对分子量为27 kD左右.此结果为进一步研究铁蛋白基因的功能提供基础.