ITS结合RPS0两步PCR快速鉴定临床5种假丝酵母菌

摘要

目的:建立快速准确鉴定常见假丝酵母菌种类的基因检测技术.方法:提取假丝酵母菌基因组DNA；第一步PCR用通用引物扩增ITS基因；第二步三重PCR用种特异性引物扩增RPS0基因；分别对已知及未知样本检测、验证.结果:ITS基因扩增,光滑假丝酵母菌(Cg)和克柔假丝酵母菌(Ck)分别得到与预期结果吻合的881 bp和419 bp的PCR产物；白假丝酵母菌(Ca)、热带假丝酵母菌(Ct)和近平滑假丝酵母菌(Cp)的ITS扩增片段均略大于500 bp；RPS0三重PCR对Ca、Ct和Cp DNA扩增,分别得到约310 bp、147 bp及110 bp的片段,与预期结果相符；30株已知假丝酵母菌两步PCR检测结果,种类符合率为100％；43株未知样本两步PCR鉴定结果,经RPS0扩增产物序列测定,符合率亦为100％.结论:建立了ITS通用基因结合RPS0种特异基因鉴定5种常见假丝酵母菌种类的两步PCR技术,该技术简单、快速、准确及廉价；对双重感染患者更有鉴别优势,有临床应用价值.