脑型糖原磷酸化酶对胃癌细胞凋亡的影响及机制

摘要

目的探讨脑型糖原磷酸化酶(PYGB)对胃癌(GC)细胞凋亡的影响及其机制。方法收集29例初诊GC患者的一般临床资料和GC组织及距肿瘤边缘>5 cm的癌旁组织作为组织标本,同时选取GC细胞系HGC-27、MGC-803、MKN45、AGS及人胃黏膜上皮细胞GES-1作为细胞标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测2种组织和上述5种细胞中PYGB mRNA的表达,采用蛋白印迹法(Western blot)检测各种细胞PYGB蛋白的表达,采用χ^(2)检验分析PYGB mRNA表达与患者临床病理特征的关系;选择PYGB mRNA表达量最高的AGS细胞作后续研究,采用RNA干扰技术根据PYGB基因合成3对siRNA(si-PYGB 1~3)序列,以Lipofectamine^(TM) 3000为转染试剂转染胃癌细胞AGS,分为Control组(空白对照)、si-NC组(阴性对照)、si-PYGB 1组(si-PYGB 1)、si-PYGB 2组(si-PYGB 2)和si-PYGB 3组(si-PYGB 3),分别采用RT-qPCR和Western blot检测各组AGS细胞PYGB在mRNA和蛋白水平上的表达;保留干扰效果最好的si-PYGB 2组,采用流式细胞术检测si-NC组和si-PYGB 2组细胞周期、凋亡及细胞内活性氧(ROS)水平。结果与癌旁组织比较,GC组织中PYGB mRNA水平表达上调(P<0.05);与GES-1比较,GC细胞AGS和MKN45中PYGB mRNA和蛋白水平上表达上调、GC细胞HGC-27和MGC-803中表达下调(P<0.05);与si-NC组比较,si-PYGB 2组AGS细胞S期比例下降、G2/M期比例上升(P<0.05),同时细胞凋亡率上升、细胞内ROS水平增加(P<0.05)。结论沉默PYGB可诱导AGS细胞凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平增加有关。