HRP标记DNA探针的制备及杂交条件探讨

摘要

目的 :用辣根过氧化物酶 (HRP)直接标记DNA探针 ,并对其斑点杂交条件进行探讨。方法 :以对苯醌 (PBQ)氧化HRP使其产生活化位点 ,并与聚乙烯亚胺PEI缩合形成HRP -PBQ -PEI复合物 ,再以戊二醛连接DNA ,共价结合构建直接酶标探针进行斑点杂交 ,利用HRP可与底物发生颜色反应的特点观察结果 ,并对不同杂交条件进行研究。结果 :成功构建了HRP标记的DNA探针 ,并进行了斑点杂交反应 ,归纳出较好的杂交条件。结论 :直接酶标DNA探针有较高的特异性及敏感性 ,操作简便快速 。