DM大鼠肾组织Id2蛋白表达变化与纤维化病变发生发展关系的研究

摘要

目的：动态观察分化抑制因子2（Id2）在糖尿病大鼠血糖控制前后肾小管上皮细胞的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化过程（EMT）中可能发挥的作用。方法：雄性SD大鼠随机分为正常对照组（N）、糖尿病组（DM）,糖尿病胰岛素治疗组（DMT）,采用链脲佐菌素（55 mg/kg）尾静脉注射复制Ⅰ型糖尿病大鼠模型,N组和DM组成模后分别于2周（2 w）、8周（8 w）、16周（16 w）、24周（24 w）时各处死6只;成模13周（13 w）起,DMT组大鼠采用胰岛素个体化治疗,以血糖控制在4-7 mmol/L,尿糖阴性为准,分别于16 w和24 w时处死6只大鼠;观察大鼠血糖、24 h尿蛋白并计算肾脏指数,HE、PAS染色光镜下观察肾组织结构的变化,免疫组化观察大鼠肾脏纤维连接蛋白（FN）的蛋白表达情况,Western blotting检测大鼠肾组织分化抑制因子（Id2）、E-钙粘素（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白变化,RT-PCR检测肾组织Id2 mRNA表达情况。结果：（1）与N组相比,不同时间点DM组血糖、24 h尿蛋白量、肾脏指数均显著升高（P〈0.01）,并出现肾组织形态学异常改变;而DMT组血糖、24 h尿蛋白量、肾脏指数均低于DM组（P〈0.05）,肾纤维化病变改善;（2）与N组比较,DM组肾组织Id2蛋白和mRNA的表达从2 w开始减少,16 w、24 w显著减少（P〈0.05）,并伴有E-cadherin的表达减少（P〈0.05）、α-SMA表达增加（P〈0.05）和FN蛋白的沉积增多（P〈0.05）,相关性分析显示Id2蛋白与FN蛋白成负相关（r=-0.931,P〈0.05）,与E-cadherin蛋白成正相关（r=0.900 0,P〈0.05）;（3）与DM组相比,DMT组大鼠肾组织Id2蛋白和mRNA表达均明显增加（P〈0.05）,且E-cadherin的表达增加（P〈0.05）、α-SMA的表达及FN在间质沉积减少（P〈0.05）。结论：胰岛素在控制血糖能上调肾小管上皮细胞Id2蛋白的表达,恢复Id2对肾纤维化的负调节作用,进而逆转肾小管上皮细胞的EMT及减轻肾间质ECM的沉积,改善DN肾纤维化病变。