骨质疏松症环境下髌下脂肪垫源间充质干细胞成骨成脂分化及淫羊藿苷的干预机制

摘要

【目的】探究骨质疏松症(OP)环境下髌下脂肪垫-脂肪源性干细胞(IPFP-ADSCs)成骨成脂分化及淫羊藿苷(ICA)的干预机制。【方法】取OP患者髌下脂肪垫(IPFP),分离和培养脂肪干细胞(ADSCs),流式细胞术进行表面标志物鉴定,茜素红染色法观察ADSCs成骨分化趋势变化,油红O染色法观察ADSCs成脂分化的趋势变化。将第3代ADSCs分为空白对照组、成骨诱导培养基组、成骨诱导培养基+100μmol/L淫羊藿苷组,培养21 d后,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法、Western-Blot法分别对应检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA、蛋白表达水平。【结果】培养至第3代的ADSCs表面标记物表现为CD90(91.73%)、CD34(0.23%)。成脂诱导21 d时油红O染色结果可见深红色脂滴,成骨诱导21 d时茜素红染色结果可见鲜红色的钙化结节。成骨诱导培养基+100μmol/L淫羊藿苷组ADSCs的Runx2、ALP mRNA及蛋白表达水平较空白对照组、成骨诱导培养基组均升高(P<0.01),PPARγmRNA及蛋白表达水平较空白对照组、成骨诱导培养基组均降低(P<0.01)。【结论】OP环境下IPFP-ADSCs可正常分化为成骨细胞和成脂细胞。淫羊藿苷可能通过促进OP环境下ADSCs的Runx2和ALP mRNA及蛋白表达、抑制PPARγmRNA及蛋白表达来抑制ADSCs向成脂细胞分化的趋势,促进其向成骨细胞方向分化。