高灵敏液相色谱-质谱联用方法用于HIV-1感染细胞中胞苷修饰全分析

摘要

目的:建立同时检测DNA上4种胞苷修饰的高灵敏液相色谱—质谱联用(LC-MS)分析方法,并用于HIV-1病毒感染对细胞中胞苷修饰的全分析。方法:选择2-溴-1-4-二乙氨基苯基乙酮(BDEPE)作为标记试剂同时标记4种DNA胞苷修饰(5-mdC、5-hmdC、5-fdC和5-cadC),再结合LC-MS方法对HIV-1病毒感染前、后细胞中的目标修饰物进行准确定性和定量分析。比较HIV-1病毒感染细胞前、后胞苷各修饰含量的变化。结果:建立了化学标记结合LC-MS分析方法,标记反应转化率达90%以上,标记产物在反应后48 h内稳定。标记结合LC-MS分析提高胞苷修饰的检测灵敏度,5-mdC、5-fdC和5-cadC在HIV-1感染后显著升高(P<0.05)。结论:本研究建立了高灵敏度的胞苷修饰检测方法,并应用于HIV-1感染细胞DNA中的4种胞苷修饰的全分析,首次发现HIV-1病毒感染后5-mdC、5-fdC和5-cadC显著升高。