秦皮苷对脂多糖诱导的软骨细胞氧化应激和炎症因子的影响

摘要

目的:探讨秦皮苷对脂多糖(LPS)诱导的软骨细胞炎症模型的抗炎抗氧化作用.方法:提取SD大鼠的软骨细胞并进行体外培养,并通过苏木精-伊红(HE)染色和番红O染色对软骨细胞进行鉴定.采用MTT法检测秦皮苷对软骨细胞的毒性.将细胞分为对照组、模型组和实验组.LPS诱导软骨细胞构建体外骨关节炎(OA)模型,并用秦皮苷进行干预.钙黄绿素/乙锭均二聚物(Calcein-AM/EthD-I)染色评价细胞活力,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测炎症相关基因和软骨特异性基因的表达,免疫荧光染色观察软骨细胞内基质金属蛋白酶(MMP)-13的分泌情况,总抗氧化能力(T-AOC)实验检测秦皮苷的总抗氧化水平,二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:HE染色显示细胞形态与软骨细胞一致,番红O染色结果表明提取的细胞为软骨细胞.5 μg/mL秦皮苷对软骨细胞无毒性,秦皮苷在该浓度下能维持软骨细胞正常的形态,抑制细胞外基质的降解,促进蛋白多糖的分泌,提高软骨细胞活力,显著下调炎症相关基因白介素(IL)-6、MMP-3、MMP-13和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,上调软骨特异性基因Ⅱ型胶原纤维α1(Col2a1)表达(P＜0.05),减少MMP-13分泌,提高总抗氧化水平,清除ROS.结论:秦皮苷对LPS诱导的OA软骨细胞具有抗炎及抗氧化的作用,其可能是OA潜在的治疗药物.