翼核果素对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制探讨

摘要

目的:观察翼核果素对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其机制.方法:通过皮下注射肝癌HepG2细胞的方法构建荷肝癌BALB/C裸鼠模型,将50只荷肝癌裸鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型组、氟尿嘧啶(20 mg/kg)组、翼核果素低、中、高剂量(1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg)组,隔天腹腔注射给药1次,模型组给予同体积的生理盐水,两周后处死裸鼠,剥离瘤块称重并计算抑瘤率.采用illumina HiseqTM测序平台对翼核果素(100μmol/L)Test组和Normal组的HepG2细胞进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq),并对结果进行基因差异表达、基因功能和信号通路富集分析.根据RNA-seq结果,采用qPCR检测c-Jun氨基末端激酶(JNK)、肿瘤坏死因子(TNF)、Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)、白介素-1(IL-1)、p53等基因的表达水平.结果:与模型组比较,翼核果素高剂量组瘤块重量显著减轻(P<0.01),抑瘤率显著升高.RNA-seq结果显示,翼核果素处理HepG2细胞后共有3052个基因的表达发生显著变化,其中1037个基因上调,1979个基因下调(P<0.05),这些差异基因主要富集在MicroRNAs、MAPK signaling pathway、Spliceo-some、p53 signaling pathway、TNF signaling pathway、mTOR signaling pathway等通路,影响肝癌细胞的增殖、免疫、周期、凋亡及代谢等功能.qPCR检测发现,100μmol/L翼核果素能够显著提高JNK、IL-1和p53的表达,降低TNF和FADD的表达.结论:翼核果素对人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用,其机制可能与翼核果素调节肝癌细胞增殖、免疫、周期、凋亡及代谢等功能有关,其中MAPK、p53和TNF信号通路可能起关键性调控作用.