应用卵裂期废弃胚胎培养建立人胚胎干细胞系的方法探索

摘要

目的:探讨应用卵裂期废弃胚胎,采用两种不同培养法建立人胚胎干细胞(hESC)系的方法.方法:将临床IVF及ICSI周期中剩余废弃的卵裂期胚胎继续培养至扩张囊胚,分别用免疫切割法及全囊胚培养法分离出内细胞团(ICM),接种在用丝裂霉素处理过的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,用hESC培养液培养、传代,建立胚胎干细胞系.通过胚胎干细胞生物学特性、特异性表面标志物、核型分析及体内外分化全能性等传统方法进行鉴定.结果:132枚废弃的卵裂期胚胎在体外继续培养后,有28枚发育为囊胚,随机分组14枚囊胚采用免疫切割法分离ICM,未得到干细胞系;另14枚采用全囊胚培养法,最终得到1个干细胞系,经鉴定,这些细胞都具有hESC的生物学特性.结论:①部分废弃卵裂期胚胎能够发育至囊胚期,可作为建立hESC系的材料来源之一;②全囊胚培养法建系成功率高于免疫切割法,尤其适用于评分低的囊胚.