人RPP蛋白与HCVRNA体外相互作用的测定

摘要

目的 检测人RPP蛋白与HCVRNA体外的相互作用。方法将人RPP各基因分别克隆至pET28a载体,在大肠杆菌中(BL21)表达的目标蛋白经蛋白纯化仪纯化获得人RPP蛋白;通过体外转录制备32P标记的HCVRNA片段作为探针,利用紫外交联试验研究各种人RPP蛋白与HCVRNA的体外相互作用。结果成功表达纯化了8种人RPP蛋白,紫外交联试验结果显示:Rpp20、Rpp21、Rpp29和Rpp304种蛋白可分别与HCVRNA片段结合,Rpp21和Rpp29结合力较强,Rpp20和Rpp30结合力则相对较弱,而其余几种RPP蛋白(包括Rpp14、Rpp25、Rpp40和Pop5)不能与HCVRNA发生结合。结论人RPP蛋白可与HCVRNA片段在体外直接结合,推测这些RPP蛋白在人RNaseP切割HCVRNA的过程中起重要作用。