旱莲苷A对HepG-2细胞凋亡作用的研究

摘要

目的 研究旱莲苷A(EcliptasaponinA)对肝癌细胞(HepG-2)的抑制增殖作用,探讨其诱导HepG-2细胞凋亡的机制。方法旱莲苷A处理HepG-2细胞后,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS,JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位的变化。Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果旱莲苷A处理细胞48h后,旱莲苷A能明显抑制HepG-2细胞的生长,且呈浓度依赖性增长趋势,其IC50为(29.8±1.6)μmol/L。与对照组相比,浓度为12.5、25μmol/L的旱莲苷A组AO/EB染色可看到凋亡细胞明显增加。流式细胞仪检测显示12.5、25μmol/L旱莲苷A组细胞周期被阻滞在S期的比例增加,分别为24.03%、43.19%,其细胞早期凋亡比例分别增加了4.06%和11.82%。浓度为12.5μmol/L、25μmol/L的旱莲苷A组细胞内ROS水平明显增加,细胞线粒体膜电位显著下降,且随着旱莲苷A浓度的增加,线粒体膜电位下降更为明显。Westernblot结果显示,旱莲苷A组凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bak表达增加。结论旱莲苷A可有效抑制HepG-2细胞增殖,其作用机制可能是通过线粒体途径抑制Bcl-2表达,促进Bak和Caspase-3的表达,诱导细胞凋亡。