马氏珠母贝α2-巨球蛋白受体结合区酵母双杂交系统的构建及自激活检测

摘要

[目的]构建马氏珠母贝(Pinctada martensii)酵母双杂交文库及α2-巨球蛋白受体结合区诱饵载体,检测其在酵母细胞中的自激活作用.[方法]利用CLONTECH SMART技术及酵母体内同源重组的方法构建马氏珠母贝酵母双杂交cDNA文库;将oα2-巨球蛋白受体结合区克隆至pGADT7载体,并转化AH109酵母感受态细胞,检测自激活作用.[结果与结论]酵母双杂交文库容量为1.11×107克隆/mL,重组率大于90％;菌落PCR结果显示,插入片段长度均在500 bp以上;诱饵质粒成功转化至AH109菌株,且无自激活性,符合文库构建指标,可用于文库筛选.