脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1基因敲低人肺癌细胞A549构建及其对线粒体功能影响

摘要

目的 建立脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1（APE1）基因敲低人肺癌细胞A549,并初步观察线粒体功能变化。方法 APE1基因shRNA序列与pSIREN-RetroQ慢病毒载体经酶切连接重组体（pSIREN-RetroQ-shAPE1）,再与病毒包装质粒共转染293T细胞;收集病毒液并感染A549细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株A549shAPE1。免疫印迹法检测稳定细胞株中APE1干扰效率。用双氧水处理A549shControl和A549shAPE1细胞24 h,分析细胞内ATP及活性氧（ROS）变化。结果 经PCR和测序鉴定成功构建重组慢病毒载体pSIREN-RetroQ-shAPE1,免疫印迹法证实A549shControl和A549shAPE1稳定细胞株构建成功;双氧水处理后,A549shAPE1细胞中ATP活性明显低于A549shControl细胞（P<0.05）,而ROS明显增加（P<0.01）。结论 APE1干扰可影响肺癌细胞中线粒体功能。