酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建

摘要

目的:用人蛋白激酶CK2α'(hCK2α')cDNA片段构建酵母双杂交体系中"诱饵"载体.方法: 通过PCR扩增已构建成功的重组质粒pThCKA'获得人CK2α'亚基编码区cDNA,将PstⅠ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样酶切的"诱饵"载体pGBKT7,转化感受态细胞DH5α获得转化子,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行限制性内切酶酶切与DNA测序的方法鉴定.将DNA测序验证的pGBKT7-hCK2α' 转染感受态酵母株AH109,Western blot鉴定hCK2α'蛋白表达,检测表达产物对报道基因的激活作用及对酵母株AH109的毒性.结果: 限制性酶切结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论值推测值相符.重组质粒pGBKT7-hCK2α'转染的酵母株AH109中能够表达hCK2α'蛋白,pGBKT7-hCK2α'无自主激活报道基因的能力及对酵母的生长无毒性.结论: pGBKT7-hCK2α'酵母双杂"诱饵"载体构建获得成功,可应用于酵母双杂交体系.