塔里木裂腹鱼肾细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响

摘要

【目的】建立塔里木裂腹鱼肾细胞系并研究盐碱度对其的影响,旨在为合理开发和利用塔里木裂腹鱼遗传资源以及建立和保护其种质资源提供一定的科学依据。【方法】采用组织块法,分别用含胎牛血清(FBS)的DME/F12培养基体外培养肾组织,初步建立塔里木裂腹鱼肾细胞系(BIM14)。采用MTT法测定分析NaCl盐度和NaHCO碱度对BIM14增殖的影响。【结果】BIM14悬浮培养传至60代;最适培养液为DME/F12;最适FBS浓度为20%;最适温度为25℃。第10代BIM14的群体倍增时间为16.80 h,呈“S”型生长。第6代BIM14液氮冻存180 d后复苏,经台盼蓝染色计数,BIM14有(91.13±0.72)%的细胞具有活性,复苏后可增殖并传代。BIM14无细菌、真菌、支原体污染。第10代BIM14线粒体16srRNA测序结果与GenBank基因序列做一致性对比,BIM14与GenBank数据库中JQ844133.1的一致率为99.91%,证明BIM14来自塔里木裂腹鱼。NaCl盐度1‰、2‰、4‰、6‰依次使BIM14增殖上升,8‰、10‰依次使BIM14增殖下降,6‰时BIM14增殖最高。NaHCO碱度2、3、4、5、6 g/L依次使BIM14增殖上升,7、8、10 g/L依次使BIM14增殖下降,6 g/L时BIM14增殖最高。BIM14增殖随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。【结论】建立了塔里木裂腹鱼肾细胞系(BIM14),盐碱度对BIM14细胞增殖有显著的影响。