阿霉素单用及联用维拉帕米对OS732细胞毒性作用的机制

摘要

目的 探讨阿霉素对OS732细胞的毒性作用，维拉帕米是否对阿霉素有增效作用及其作用机制。方法 用MTT法检测肿瘤细胞存活率，比较单用阿霉素及联用维拉帕米对OS732细胞的毒性作用；以流式细胞仪方法检测阿霉素及联用维拉帕米诱导后不同时间点OS732细胞多药耐药指标（Pgp,TopoⅡ和GSTπ）表达情况；以琼脂凝胶电泳法观察阿霉素单用及联用维拉帕米诱导后不同时间点OS732细胞抽取DNA的电泳图；流式细胞仪方法检测阿霉素及联用维拉帕米诱导后OS732细胞凋亡相关因子CD95及Bax蛋白的表达情况。结果 （1）随阿霉素的浓度递增，OS732细胞的存活率呈下降趋势，即阿霉素对OS732细胞生长抑制率呈浓度相关性。同剂量阿霉素对OS732细胞随作用时间延长，细胞存活率下降，但这种趋势并不随时间延长而等幅递增。维拉帕米增强阿霉素对OS732细胞的毒性作用。（2）阿霉素可使OS732细胞获得性耐药，且这种获得性耐药与Pgp,TopoⅡ和GSTπ有关。Pgp和GSTπ表达存在相关性。阿霉素诱导后OS732细胞Pgp和GSTπ表达随时间延长而上调。维拉帕米延缓乃至下调了Pgp的表达。而对TopoⅡ及GSTπ无类似作用。（3）促进肿瘤细胞亡是阿霉素的抑瘤机制之一，且与Fas介导的细胞凋亡途径有关。与Bax途径无关。阿霉素诱导的OS732细胞凋亡呈时间依赖性。维拉帕米可促进阿霉素诱导的OS732细胞凋亡。结论 维拉帕米使阿霉素对OS732细胞的毒性作用增强。临床上应用阿霉素化疗时，更宜选用持续性静脉滴注给药，且以维持48h为宜。阿霉素作用后，OS732细胞获得性耐药与Pagp,TopoⅡ和GST－π有关。阿霉素对OS732细胞毒性作用与它能促进细胞凋亡有关，而维拉帕米延缓Pgp介导的多药耐药的同时促进阿霉素诱导的细胞凋亡。因此，通过促进肿瘤细胞凋亡来实现肿瘤化疗多药耐药的逆转是一条有效途径，本研究为进一步进行肿瘤分子这治疗的研究提供实验基础。