福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定

摘要

目的从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素,测定其活性和毒性.方法应用CM-Sephadex C-50离子交换色谱,阶段梯度洗脱分离粗毒;用Sephadex G-50凝胶过滤纯化组分;用大鼠体外膈神经-膈肌标本鉴定分离组分对神经-肌肉接头的作用性质;观察神经毒素对乙酰胆碱(Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响;以Meier法测定神经毒素对小鼠的半数致死量(LD50).结果眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得A～N共14个蛋白峰,经鉴定E、F、G、H、I、K等6个蛋白峰具有阻断神经-肌肉接头传导的作用,被鉴定为神经毒素,约占粗毒的48.3%;通过凝胶过滤对E、G和K组分进行初步纯化;E、G和K组分可使Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移,它们与N2-胆碱受体(N2-AchR)的解离常数(KD)分别为:145.87,73.53和20.04 ng/mL;E、G和K组分小鼠静脉注射的LD50分别为:0.884,0.749和1.58 mg/kg.结论眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得6个神经毒素组分,经鉴定E、G和K组分为N2-AchR的竞争性拮抗剂.