聚合酶链反应微孔酶免疫法检测新型隐球菌

摘要

目的建立一种检测脑膜炎新型隐球菌聚合酶链反应(PCR)产物的微孔酶免疫方法. 方法对PCR所用2条引物进行双标记,使扩增产物一端标记上生物素,另一端标记上地高辛,通过包被在微孔板上的亲和素捕获固定,然后用碱性磷酸酶标记的地高辛抗体反应后显色测定. 结果三种PCR产物检测方法的对照分析表明微孔板酶免疫法敏感性最强,加样量38 nL时即可显色,模板DNA经过1011倍稀释后仍为阳性结果;聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖电泳则分别可检测到0.3125 μL,1.25 μL 及107,104稀释度. 对临床脑脊液标本的检测结果微孔板酶免疫法和聚丙烯酰胺凝胶电泳的符合率为100%,二者敏感性均高于琼脂糖电泳. 结论建立的方法与常规电泳法相比灵敏准确,结果判断客观,重复性也较好;所测结果可相对反应PCR产物量的多少,此方法可取代电泳法成为常规检测PCR产物的方法.