兔抗人NDR2高效价抗血清的制备、纯化及鉴定

摘要

目的制备高效价的NDR2抗体. 方法构建pRset-A-ndr2, pGEX-4T-1-ndr2-a和pGEX-4T-1-ndr2-b三种重组表达质粒,并分别在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白;用全长GST-NDR2蛋白免疫兔,然后用GST-NDR2-A和GST-NDR2-B片段加强免疫;对包涵体形式表达的6His-NDR2进行初步的纯化;利用固定于硝酸纤维素膜上的NDR2抗原亲和吸附纯化抗血清. 结果经免疫得到了高效价的兔抗人NDR2多克隆抗血清,亲和纯化提高了NDR2抗体的特异性;免疫组化表明NDR2是一种胞浆蛋白. 结论用全长NDR2蛋白免疫兔,再用片段加强免疫,可以提高蛋白的抗原性,制备得到高效价的抗体. 纯化后的特异性NDR2抗体,为进一步研究NDR2的功能打下了必要的基础.