分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

摘要

目的 :构建E .coli. BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6 .方法 :用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H37Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 (19 ss)胞壁区及其上游调控元件基因 ,克隆入E .coli. BCG穿梭载体pOLYG中 ,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E .coli. BCG穿梭载体 .用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT 6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达 .结果 :经测序证实所克隆的 19 ss基因序列正确 ,所构建的E .coli. BCG穿梭载体 (pCW)能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭 ,经免疫荧光检查外源基因Ag85B ESAT 6可融合表达于分枝杆菌宿主表面 .结论 :本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B ESAT 6的E .coli. BCG穿梭质粒 .