Notch1在TGF-β1诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用

摘要

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β_1)诱导心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFB)转分化过程中Notchl的变化情况,探讨在此转分化过程中Notchl的可能作用.方法:体外分离培养CFs,以10gμ／L TGF-β_1诱导CFs向MFB转分化.实验分为对照组,TGF-β_1作用24,48,72 h组,采用消化法 测定羟脯氨酸(HYP)含量;免疫荧光、免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时定量PCR、免疫印迹法测定Notchl mRNA及蛋白表达.利用γ分泌酶抑制剂DAPT(75μmoL／L)阻断Notch1受体活化.实验分对照组,DAPT作用24,48,72 h组,检测SMA及胶原的表达变化.结果:TGF-β_1作用后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随TGF-β_1诱导时间的增加呈上升趋势,而Notch1则呈下降趋势,均以72 h最显著(P<0.01);加入DAPT后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随DAPT作用时间增加旱上升趋势,以72 h最显著(P<0.01).结论:TGF-β_1可以诱导CFs向MFB转分化,Noteh1在此过程中的表达呈下降趋势,而DAPT阻断Notch1活化后可以促进CFs向MFB转分化.