NLS-RARα与ISCA1相互作用在哺乳动物细胞中的验证

摘要

目的:利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1(ISCA1)与带核定位信号的维甲酸受体α(NLSRARα)蛋白间的相互作用.方法:构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV-HA-NIS-RARα和pCMV-Myc-ISCA1,酶切及测序鉴定正确后,转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术进一步证实二者之间的相互作用.结果:真核表达载体成功构建并经测序鉴定,转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc mAb进行蛋白印记检测,可以检测到Myc-ISCA1蛋白的表达.结论:分别成功构建了含HA-NLS-ILARα与Myc-ISCA1融合蛋白的真核表达载体,并利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术在体外证实了NISRARd与ISCA1之间存在相互作用.