细胞穿膜肽TAT与小鼠干细胞转录因子Oct4融合表达及纯化

摘要

将TAT-Oct4目的基因插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a-TAT-Oct4,形成大肠杆菌重组表达体系.融合蛋白TAT-Oct4在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达产物经纯化后,纯度可达90％以上.通过尿素梯度透析复性,TAT-Oct4平均复性收率为8.8％.细胞免疫荧光技术分析表明,TAT-Oct4融合蛋白可穿透近100％细胞的细胞膜,其进膜后主要分布于细胞核内.建立了具有活性的TAT-Oct4融合蛋白生物制备方法,为细胞重编程提供了一种有效的研究材料,并可为其他用于细胞重编程的干细胞转录因子设计提供实用的方法学.