粘质沙雷氏菌马来酸顺反异构酶表达纯化及酶学性质

摘要

从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)中扩增得到马来酸顺反异构酶基因.将该基因连接到pET24a载体上,并在Escherichia coli BL21 (DE3)中实现了成功表达.酶学性质研究表明,重组酶的比酶活力为48.01 U/mg.其最适温度为37℃,最适pH为8.4.在最适反应条件下,Km值为4.20 mmol/L,Vmax为1.27 mmol/(L· min),kcat为4.38 s-1,催化效率kcat/Km为1.04 L/(mmol·s).研究结果进一步显示,马来酸顺反异构酶具备良好的热稳定性(55℃半衰期为1.5 h)及高达99％以上的转化率,为马来酸顺反异构酶的进一步研究和工业应用制备高纯度的富马酸提供了理论基础和支持.