奶牛α-1,3-岩藻糖基转移酶基因的克隆表达

摘要

唾液酸化路易斯-X(sialyl lewis x,Slex)是选择素家族的一个共同糖配体,通过与选择素竞争性地结合炎性细胞,可以抑制炎症反应.克隆表达Slex合成过程中的关键酶,就可以在体外进行Slex的生物合成,从而进行相关生物制剂的开发.α-1,3-岩藻糖基转移酶(alpha-(1,3)-fucosyhransferase,FT)就是参与Slex生物合成过程的关键酶之一.利用相关软件对牛的FT基因进行了生物信息学的分析,了解了FT的相关理化性质.通过PCR的方法获得了兀T基因,构建了重组质粒pMD19-FT,并亚克隆至表达载体pPIC9K.通过电转化将线性化的表达质粒pPIC9K-FT整合到宿主菌Pic hia pastoris GS115基因组上,构建了重组酵母GS115-FT.经诱导表达后,SDS-PAGE检测到了目的蛋白质条带,证明了此基因在P pastoris GS115中能够可溶性表达.