3α-羟类固醇脱氢酶的亲和纯化及化学修饰提高酶稳定性

摘要

研究了3 α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)经化学修饰后的稳定性变化.已构建的基因工程菌E.coli BL21 (DE3)/pET28a-hsd经诱导表达、镍柱亲和纯化得到电泳纯的3α-HSD酶,酶蛋白得率是16.5％,活性回收率为64.7％,纯化倍数约为3.8,15％ SDS-PAGE结果显示3α-HSD酶为单一条带,相对分子质量在28 000左右 采用邻苯二甲酸酐(PA)作为修饰剂,对3α-HSD纯酶进行化学修饰,与对照组相比,修饰酶抵抗pH波动的能力有所增强,50℃水浴10 min后酶的热稳定性明显提高,37 ℃贮藏40 h后修饰酶的贮藏稳定性比原酶提高9倍.