肉制品生产工艺对沙门氏菌活的非可培养状态的诱导及检测方法研究

摘要

目的探索肉制品生产工艺对活的非可培养(viable but non-cultruable,VBNC)状态沙门氏菌的诱导因素,并建立一种快速检测肉制品中VBNC状态沙门氏菌的检测方法加以应对。方法通过高温、低温、高渗透压、防腐剂、杀菌剂等生产工艺处理获取VBNC状态沙门氏菌,使用脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SD)和PMAxx处理菌液,依据ttr基因进行荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)建立SD-PMAxx-qPCR进行检测。采用人工污染的方式对VBNC状态沙门氏菌进行检测和验证。结果65℃处理40 min可使沙门氏菌快速进入VBNC状态,添加0.1 g/L山梨酸冷藏状态可使少量沙门氏菌缓慢进入VBNC状态。SD-PMAxx-qPCR能显著区分沙门氏菌的存活状态,最佳条件为0.08%SD,20μmol/L PMAxx,黑暗孵育10 min、光解10 min。纯培养时活菌的检出灵敏度为100 CFU/mL,添加高浓度死菌时,检出灵敏度不变。通过人工污染添加至样品时,需要对样品进行涂布确认其沙门氏菌不可培养,通过100℃加热样品10 min作为阴性对照,从而通过对比循环阈值实现样品中VBNC状态沙门氏菌的检测。结论沙门氏菌在肉制品生产过程中容易受到多种因素诱导进入VBNC状态,本研究建立了SD-PMAxx-qPCR快速区分沙门氏菌的存活状态,可用于肉制品中VBNC状态沙门氏的检测,为肉制品安全生产提供技术保障。